प्रतिबंधित एंजाइम एंजाइम हैं जो एकल और दोहरे फंसे हुए डीएनए दोनों में कटौती करते हैं। प्रत्येक प्रतिबंध एंजाइम में एक विशिष्ट न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम होता है, जिसे प्रतिबंध साइट कहा जाता है, जिसे वह पहचानता है और कटौती करता है प्रतिबंध एंजाइमों का उपयोग डीएनए अनुक्रमण, उत्परिवर्तनीय विश्लेषण और डीएनए के क्लोनिंग और प्रवर्धन के लिए किया जाता है। वैज्ञानिक, अभिव्यक्ति वैक्टर, डीएनए अणुओं में ब्याज के जीन को सम्मिलित करने के लिए प्रतिबंध एंजाइम का उपयोग करते हैं जो कि गुणसूत्र डीएनए से अलग कर सकते हैं। ब्याज की जीन वाले वेक्टर को तब प्रोटीन की अभिव्यक्ति और लक्षण वर्णन के लिए एक बैक्टीरियल तनाव में पेश किया जा सकता है।
दिन का वीडियो
चरण 1
प्रतिबंध के नक्शे को देखकर अपने सदिश पर प्रतिबंध एंजाइम साइटें पहचानें। प्रतिबंध मैप आपको बताएगा कि एंजाइम आपके वेक्टर को कैसे कट जाएंगे, और कहां
चरण 2
एक प्रतिबंध एंजाइम चुनें, जिसमें सम्मिलित होने के क्रम को देखते हुए आपके जीन डालने पर मौजूद साइट भी मौजूद है। सुनिश्चित करें कि प्रतिबंध साइट आपकी प्रविष्टि की स्थिति में है, जो ब्याज की जीन के बाहर है, इसलिए आप जीन के किसी भी भाग को खोना नहीं चाहते हैं।
चरण 3
यह सुनिश्चित करें कि प्रतिबंध जीन डाइक्ट या वेक्टर में कहीं भी डुप्लिकेट नहीं हैं। इससे आपके डीएनए में कई कटौती हो सकती है और आपको गुमराह करने वाली डेटा मिल सकती है।
चरण 4
प्रतिबंध एंजाइमों का चयन करने की कोशिश करें जो चिपचिपा सिरों से काटते हैं, बजाए कुंद समाप्त होने के बजाय स्टिकी छोरें तब होती हैं जब एंजाइम एक छोटे से फंसे हुए डीएनए को कमजोर तरीके से तब्दील कर देता है, एक एकल फंसे हुए ओवरहाँग को छोड़ देता है जो कि एक डालने की कटौती से विपरीत तरीके से कटौती की सुविधा देता है। ब्लंट का अंत तब होता है जब डबल-फंसे हुए डीएनए को एक चिकनी तरीके से काटा जाता है, और इन्हें संलग्न करना अधिक कठिन होता है।
चरण 5
अपने डालने के दोनों छोरों के लिए एक अलग प्रतिबंध एंजाइम चुनें ताकि सुनिश्चित हो सके कि इसे उचित अभिविन्यास में वेक्टर में डाला गया है और यह सुनिश्चित करने के लिए कि वेक्टर स्वयं को फिर से संलग्न नहीं करता है।
चरण 6
दो प्रतिबंध एंजाइमों को चुनने का प्रयास करें जो एक ही बफर सिस्टम और तापमान में अच्छी तरह से कार्य करते हैं। यदि यह संभव नहीं है, तो प्रत्येक पाचन अलग से चलाएं
चीजें आपको आवश्यकता होगी
- जीन डालने की अनुक्रम
- पसंद के वेक्टर के लिए प्रतिबंध मानचित्र
- प्रतिबंध एंजाइमों की सूची और उनकी कट साइटें
टिप्स
- कुछ वेब प्रोग्रामों को पहचानने के लिए विकसित किया गया है एक डीएनए अनुक्रम पर प्रतिबंध साइटों जल्दी से ऐसा ही एक कार्यक्रम न्यू इंग्लैंड बायोलाब्स का है
